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使用前標(biāo)本準(zhǔn)備：

冰凍切片標(biāo)本可采用 (1) 新鮮組織，特點(diǎn)是快速，但未用完的包埋組織塊不能保存；(2) 使用經(jīng)典方法10%甲醛或4%多聚甲醛室溫2~10分鐘固定過的組織，優(yōu)點(diǎn)是既不影響后續(xù)步驟，包埋組織塊又可長(zhǎng)期冰凍保存，隨時(shí)再用，缺點(diǎn)是步驟稍繁。(3) 培養(yǎng)細(xì)胞，800g離心10分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，用吸頭或針頭撥出細(xì)胞沉淀塊，放入OCT包埋劑內(nèi)。

應(yīng)避免采用降低組織冰點(diǎn)的甲醇乙醇固定。本產(chǎn)品說明書不提供關(guān)于組織取材、滲透、固定、冰凍切片等技術(shù)信息。用戶應(yīng)閱讀冰凍切片機(jī)操作手冊(cè)，參考各種常規(guī)技術(shù)方法。

使用方法：

1. OCT包埋：用水或PBS沖洗固定的組織塊，用吸水紙吸去液體。在盛標(biāo)本的包埋模子內(nèi)，擠出適量的包埋劑，放入組織和細(xì)胞沉淀塊，加包埋劑wanquan埋沒組織塊?？捎?層鋁箔紙折疊成簡(jiǎn)易的模子。如有氣泡可用針頭或吸頭吸出。

2. 冰凍：將盛有組織細(xì)胞和包埋劑的模子，正置于切片機(jī)冷室內(nèi)冰凍10分鐘。此時(shí)，包埋劑為乳白色固體。包埋劑和組織冷凍時(shí)體積略有膨脹，因此模子應(yīng)正置，由底部向頂部進(jìn)行冰凍。也可將OCT包埋的組織置于干冰或液氮，或放入－40~－70 ºC冰箱冰凍固化保存，用前取出置于切片機(jī)冷室內(nèi)平衡溫度(否則損壞刀)。

3．切片：可在切片機(jī)的組織卡盤(chuck)上加少許包埋劑并在其固化前嵌入組織塊，然后再于組織周圍加入少許包埋劑使其穩(wěn)定。進(jìn)行常規(guī)切片，厚度范圍2~100 µm。

4. 收片后，用適量水或PBS沖洗切片3次，每次2−3分鐘，洗除包埋劑。而后可進(jìn)行常規(guī)組化染色、病理染色、原位雜交。未用完的組織塊可冷凍儲(chǔ)存。